原位杂交仪的应用

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。原位杂交仪基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已 成为最有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。DNA荧光标记探针是其中最常用的一类核酸探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的DNA进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。原位杂交仪应用:①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测;③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;④基因在染色体上的定位;⑤检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。原位杂交仪可根据实验者的设计,在玻片上一步完成原位杂交(FISH)中变性和杂交两个过程,而且能严格控制反应温度和环境湿度,在保证实验的成功率和重复率的基础上极大地提高实验效率。原位杂交仪采用微电脑控温,程序化变性/杂交步骤,使用方便。在获得理想的实验结果同时,大大缩短了手工操作时间。变性/杂交在内连续完成,缩短手工操作时间50%以上,减少有害溶液的用量,控温精确,无须玻片装满,每次可以操作12个样本,玻片放置/取出方便,单手可完成,易清洁的设计,紧凑设计,节省空间,适合多种样品,节约人工和试剂成本。原位杂交仪的特点:程序化操作;保证实验结果更准确;可容纳12个玻片,良好的密封性保证样本的最佳温度和湿度。有40个用户程序和三种操作模式,适合各种原位原杂交实验。用户程序设定;40种程序可供选择。变性/杂交模式、杂交模式和固定温度模式三种操作模式,大屏幕随时显示实验条件,实验过程一目了然,易于操作的数字键,可用作玻片加热器。插入保湿片,关上盖子;精确的温度控制;快速升降温,温度从37摄氏度升至95摄氏度仅需2分钟,95摄氏度降至37摄氏度仅需5分钟,温度的高度均一性理想的温度控制,操作方便。


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