原位杂交仪厂家 原位杂交技术的优点及发展前景

原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH),原位杂交仪厂家是一种固相分子杂交的方法,它是用标记的DNA或RNA为探针,在原位检测组织或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。常用的同位素标记物有3H、35S、125I和32P,非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种。探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针和合成寡核苷酸探针。探针的荧光素标记可以采用直接和间接标记的方法。间接标记是采用生物素标记的dUTP(biotin-dUTP) 经过缺口平移法进行标记;而直接标记法是将荧光素直接与探针核苷酸的磷酸戊糖骨架共价结合,或在缺口平移法标记探针时将荧光素核苷三磷酸掺入。原位杂交术可在原位检测细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达,有很高的敏感性和特异性,已成为细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)是一种分子细胞遗传学技术,是20世纪80年代末期发展起来的一种非放射性原位杂交技术。原位杂交仪厂家目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。FISH的基本原理是用荧光标记的单链核酸为探针,与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。可用荧光标记的探针直接与染色体进行杂交从而对基因进行染色体定位。代表性应用: 1、恶性肿瘤和病毒的诊断及鉴别诊断;2、细胞和组织的基因表达;3、完整的原位杂交实验解决方案。原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高,可以通过延长曝光时间加强信号强度,故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等。采用荧光标记系统则可克服这些不足,这就是FISH技术。FISH技术作为非放射性检测体系,具有以下优点:1、荧光试剂和探针经济、安全;2、探针稳定,一次标记后可在两年内使用;3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确;4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。FISH技术作为连接分子生物学与细胞生物学的桥梁地位已为世人所公认。尽管目前FISH技术无法达到100 完全杂交,特别是在应用较短cDNA探针时存在杂交效率明显下降的问题,但随着各种新型分子探针以及更为精密高端的光学显微镜和功能强大的计算机分析系统的不断问世,上述问题将会逐步得到解决,该技术的作用正变得日益重要,应用领域也得以不断扩展。FISH技术在泌尿系统肿瘤研究领域的巨大潜力与光明前景将引领我们进入全新时代。


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