原位杂交仪支持断电恢复功能

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(ISH),原位杂交仪是将分子杂交与组织化学相结合的一项技术。使用标记的DNA或RNA探针,在原位检测组织、细胞中存在的特定并且正在表达的核酸序列(基因)的方法。

80年代初,放射性同位素标记探针的被大量应用。而自1988年,以地高辛配体为主体的DIG检测系统问世以来,非同位素标记的原位杂交探针以其分辨敏感性高,耗时少,已成为原位杂交技术的重要标记手段。DIG检测系统使用地高辛(DIG)标记的探针与目标核苷酸序列结合,再应用HRP标记的抗地高辛抗体通过免疫组织化学方法在目标核酸原位形成带颜色的杂交信号,特异性地显示细胞中特定的DNA或RNA。

影响原味杂交检测质量的几个关键因素:(一)组织固定脱水的质量:固定不及时或固定不足导致细胞核酸断裂蛋白质自溶,胃酶消化后组织细胞结构模糊,原位杂交检测结果不能判读或假阴性。组织脱水不良有可能引起强烈的非特异性背景染色。(二)胃蛋白酶消化的质量:胃蛋白酶消化不足将影响探针与目标核酸杂交的结合程度,引起阳性减弱或假阴性等检测结果。(三)变性、杂交的温度与时间:在杂交变性过程中,特别是DNA变性杂交温度必须达到预设温度,变性温度过低导致DNA双链不能打开,探针不能与目标DNA结合,出现假阴性检测结果。(四)原位杂交操作流程的规范性:在检测过程中的干片、未使用杂交洗液、PBS清洗不足、DAB显色时间过长等因素有可能引起组织内非特异性背景染色。

原位杂交操作流程:石蜡包埋组织切片,切片厚度4-6μm切片,防脱载玻片贴片;烤片 60℃ 2-16小时;新鲜二甲苯脱蜡 2×10分钟;100%乙醇后空气干燥 5分钟;胃蛋白酶消化,37℃孵育 30分钟;弃去胃酶工作液,去离子水冲洗3×1分钟,逐级酒精脱水、空气干燥 3×1分钟;10-20μl探针/切片,加盖玻片, 37℃杂交2~4小时或过夜;切片插入PBS缓冲液中以便去掉盖玻片 10分钟;PBS缓冲液洗 3×2分钟;滴加杂交后洗液,37℃孵育15分钟;PBS缓冲液冲洗2分钟×3次;切片上加入适量辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体,37℃孵育30分钟;PBS缓冲液冲洗2分钟×3次;去离子水冲洗后,滴加DAB工作液,孵育 5-15分钟;弃去显色液,去离子水冲洗,苏木素复染,脱水、透明、封片。

原位杂交仪在原位杂交和FISH实验中变性温度是至关重要的环节,也是确保实验成功的关键步骤。原位杂交仪原位杂交仪可以根据实验者的设置,自动完成变性和杂交过程。严格的温度控制,适宜的湿度环境,加上低廉的成本,和时间上的节省,为分子水平的研究提供了可靠的保证。原位杂交仪系统可设定恒温、定时等条件,较传统的手动实验精确度高,实验结果更为可靠,同时又取代了人工手动实验操作。杂交与变性可同时进行,减少了实验步骤,大大提高了工作效率和实验的准确性。

原位杂交仪采用微处理技术结合PID控制方式,实现12张玻片的变性和杂交过程。密封式上盖和加湿部件确保杂交环境更加理想,集成了变性/杂交、杂交、多步运行三种操作模式,适用于多种原位杂交实验。1.全触摸屏操作,友好的人机操作界面;2.中/英文菜单可选;3.支持断电恢复功能,运行过程出现意外断电,在电力恢复后可按原定程序自动恢复运行;4.支持运行结束后自动降温功能;5.支持自动预热功能;6.平台控温精度高,温度波动小;7.可同时处理12片载玻片;8.支持105个自定义程序储存功能;9.集成了变性&杂交、杂交、多步运行三种操作模式。


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