原位杂交仪,自我介绍


PCR,中文译为聚合酶链式反应,它是一种DNA的快速扩增技术,其扩增效率之高就象核裂变的“链式反应”一样。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热的酶的作用,可以在3个小时内把特定的DNA量提高1000万倍。


PCR仪也叫基因扩增仪,它是利用PCR技术对特定基因做试管内的大量合成,也就是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。基因扩增仪一般分为四种:普通基础PCR仪,梯度PCR仪,实时荧光定量PCR仪,原位PCR仪原位杂交仪

 

(1)普通基础PCR仪 


一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,叫做普通基础PCR仪。普通基础PCR仪由主机,加热模块,PCR管,热盖,控制软件组成。


 (2)梯度PCR仪


在一次性PCR扩增中可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常12种温度梯度,这样的仪器就叫梯度PCR仪。


(3)实时荧光定量PCR仪


在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法,叫做实时荧光定量PCR技术,也称real-timeQ-PCR。


(4)原位PCR仪


原位PCR仪原位杂交仪是在组织细胞里进行PCR反应的一种基因扩增仪。它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,可以对细胞或组织内的DNA片段进行原位扩增分析—即定位分析。原位PCR仪由主机,加热模块,玻片,热盖,控制软件组成。


普通的PCR虽然能扩增包括福尔马林固定、石蜡包埋组织的各种标本的DNA,但扩增的DNA或RNA产物不能在组织细胞中定位,因而不能直接与特定的组织细胞特征相联系,这是该技术一个局限性。原位杂交虽具有良好的定位能力,但由于其敏感性问题,尤其是在石蜡切片中,尚不能检测出低含量的DNA或RNA序列。而原位PCR可使扩增的特定DNA片段在分离细胞和组织切片中定位,从而弥补了PCR和原位杂交的不足。


原位PCR反应是在载玻片的平面上进行,保持水平可以使反应各组分均匀地分布在组织切片上,所以须在原位PCR仪上进行,该仪器不但可以使载玻片保持水平,而且还可以给载玻片进行均匀地加热,保证扩增反应的顺利进行。


原位PCR仪是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术,目前应用还不太广泛。原位PCR既能分辨鉴定带有靶序列的细胞,又能标出靶序列在细胞内的位置,于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。


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