原位杂交仪实验要求及步骤

根据探针的标记物是否直接被检测,原位杂交仪又可分为直接法 和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交,杂交后分别通过放射自显影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间 接法一般用半抗原标记探针,最后通过免疫组织化学法对半抗原定位,间接地显示探针与靶核酸形成的杂交体。

基本要求组织取材:组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快,所以新鲜组织和培养细胞最好在30min内固定。

固定目的是:(1)保持细胞结构;(2)最大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平;(3)使探针易于进入细胞或组织。最常用的固定剂是多聚甲醛,与其它醛类固定剂(如戊二醛)不同,多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接,因而不会影响探针穿透入细胞或组织。


除非注明,发表在“原位杂交仪”的仪器信息『原位杂交仪的操作步骤』版权归原位杂交仪_admin所有。 转载请注明出处为“本文转载于『原位杂交仪』原地址http://lygznh.com/post/264.html